本公司生產的TOP10感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌TOP10菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10⁸cfu/ug，-80℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實驗成本。質量穩(wěn)定，使用方便，質優(yōu)價廉。

TOP10菌株介紹

該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增。能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定復制。其φ80,IacZ?M15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍白斑篩選。

操作步驟

（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1、  取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

注意：一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態(tài)細胞為例。

2、  向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（100μl的感受態(tài)細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕彈混勻，在冰浴中靜置30min。

3、  將離心管置于42℃水浴中放置60-90sec，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3min，該過程不要搖動離心管。

注意：此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置5-8min左右，如果室溫較低，可延長時間至8-15min左右。條件允許建議使用42℃熱激方法。

4、  向每個離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45min（150rpm），目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、  將離心管內容物混勻，吸取100μl已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕地將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16h。

注意：涂布用量可根據(jù)實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4000rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩余的菌液再涂布新的培養(yǎng)平板）

注意事項

1、  感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2、  進行轉化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。

3、  為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到最低。